Los Servicios Tecnológicos de Alto Nivel (STAN) comprenden actividades tales como ensayos, análisis, asistencia técnica y capacitación que utilizan el equipamiento, la infraestructura y los recursos humanos especializados del INIBIOLP y se brindan a distintos sectores de la sociedad.
Actualmente el INIBIOLP ofrece los siguientes STANs:
Detalle STAN: Análisis de ácidos grasos por Cromatografía Gaseosa Capilar en muestras de diferente origen que contengan lípidos.
Metodología: Se empleará un método analítico de extracción, purificación y derivatización adecuado a la muestra para obtener los ésteres metílicos de ácidos grasos (EMAG).
Se realizará el análisis de la muestra en un cromatógrafo gaseoso y mediante el empleo de estándares comerciales de EMAG para la identificación, se obtendrá el perfil de ácidos grasos de la muestra.
Equipamiento: Cromatógrafo Gaseoso Capilar HP 6890 equipado con una columna capilar polar para análisis de ácidos grasos y detector de ionización por llama (FID).
Detalle STAN: Análisis por cromatografía gaseosa - espectrometría de masa para la detección / identificación de compuestos o contaminantes orgánicos.
Metodología: 1) Determinación de condiciones óptimas de operación en función de la naturaleza de la muestra. Toma de muestra (líquida o gaseosa) e inyección. Entrega de cromatograma y espectros de interés en versión impresa o electrónica.
2) Asignación de identidad por comparación de los espectros obtenidos con bibliotecas comerciales de espectros (NIST 05/EPA/NIH, pesticidas, aceites esenciales y otras) y con espectros obtenidos de estándares (provistos por el solicitante).
Equipamiento: Cromatógrafo gaseoso capilar con detector de espectrometría de masa Agilent Technologies CGC-HP6890 MS5975VL.
Detalle STAN: Fraccionamiento de muestras biológicas por ultracentrifugación diferencial.
Metodología: El fraccionamiento de muestras biológicas se efectuará previa selección del rotor y velocidad de rotación adecuados, densidad del solvente, etc.
Puesta en régimen del equipo, cargado de muestras y ultracentrifugación.
Equipamiento: Ultracentrífuga preparativa Beckman Coulter LE-80K.
Detalle STAN: Evaluación de capacidad insecticida. Análisis de eficacia insecticida de agentes insecticidas químicos, físicos o biológicos mediante determinación de mortalidad, efecto en el ciclo de vida de insectos, etc., y/o evaluación de dosis letales.
Metodología: Se efectúan bioensayos exponiendo insectos a los compuestos a evaluar. El modo de aplicación depende de las propiedades fisicoquímicas del compuesto y/o según solicitado. Se emplean lotes de al menos 10 insectos, con al menos 4 réplicas por concentración o condición a ensayar. Análisis estadístico de los resultados.
Puesta en régimen del equipo, cargado de muestras y ultracentrifugación.
Detalle STAN: El servicio está dirigido a quienes requieran purificar o separar biomoléculas como proteínas, péptidos, polinucleótidos, entre otras, mediante el uso de cromatografía líquida (FPLC o HPLC) empleando columnas de intercambio aniónico.
Metodología: Se utiliza una columna intercambiadora aniónica (Mono-Q 10/100 GL) empleando gradientes de solventes de fuerza iónica creciente. La detección se realiza con un detector UV-Vis. El servicio cuenta con la posibilidad de termostatizar la muestra entre 4-40 °C.
Se realiza la recolección en tubos, los cuales son entregados al finalizar el STAN junto con un informe de los resultados como cromatogramas y tablas, para posterior concentración y análisis por parte del solicitante. Las actividades comprendidas en el presente STAN no revisten carácter de certificación.
Equipamiento: Cromatógrafos HPLC Agilent Technologies modelo 1260 Infinity y HPLC Waters modelo ARC.
Detalle STAN: El servicio está dirigido a quienes quieran identificar, cuantificar y/o separar analitos, mediante el uso de HPLC utilizando columnas de fase reversa con distintas propiedades de resolución.
Metodología: Se utilizan columnas de fase reversa (C18, C8, etc). El servicio cuenta con la posibilidad de termostatizar la muestra entre 4 - 40 °C y de la columna entre 4 - 60 °C, empleando métodos isocráticos o en gradientes de solventes y detección UV-Vis.
Para la IDENTIFICACIÓN y/o CUANTIFICACIÓN: se realiza una curva de calibración con el estándar (cada punto y cada inyección por duplicado).
PURIFICACIÓN y/o SEPARACIÓN: se realiza la recolección en tubos los cuales son entregados para posterior concentración por parte del solicitante.
Se entrega el informe de los resultados como cromatogramas y tablas para posterior análisis por parte del solicitante. Las actividades comprendidas en el presente STAN no revisten carácter de certificación.
Equipamiento: HPLC Waters modelo ARC.
Detalle STAN: El servicio está dirigido a quienes quieran purificar proteínas y otras macromoléculas mediante cromatografía líquida (FPLC o HPLC) empleando la exclusión molecular. Contamos con columnas con distintos rangos de tamaños.
Metodología: Se utilizan columnas de exclusión molecular para separar las siguientes macromoléculas.
Dextranos en los siguientes rangos:
* 500 -30.000 Da (Superdex 75 10/300 GL)
* 1-100 KDa (Superdex 200 10/300 GL)
* 1-300 KDa (Superosa 6 30/100GL).
Posibilidad de termostatizar la muestra entre 4 y 40 °C. Se eluyen los analitos con buffer acuoso (TRIS, PBS) de manera isocrática.
La detección se realiza midiendo la absorbancia con detector UV-VIS.
Para la purificación y/o separación el solicitante debe concurrir con las muestras en condiciones para el análisis cromatográfico (filtradas y/o centrifugadas previamente). El volumen máximoque se inyecta por corrida es de 500 microlitros (se lo considera 1 muestra). Se realiza la recolección en tubos que son entregados al solicitante para posterior concentración. Las muestras pueden ser iguales o diferentes siempre y cuando se mantengan las mismas condiciones cromatográficas.
Se entrega un informe de los resultados conteniendo cromatogramas y tablas. El mismo no reviste carácter de certificación.
Equipamiento: HPLC Waters modelo ARC.
Detalle STAN: Determinación de toxicidad de drogas o compuestos en células en cultivo.
Metodología: El servicio básico incluye la incubación de células con la droga o compuesto de interés, su tinción con violeta cristal o la determinación de actividad mitocondrial por métodos colorimétricos clásicos (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazolio)-2,5-difenil-tetrazolio (MTT)) a fin de evaluar el efecto de la droga/compuesto sobre la proliferación/viabilidad celular. La línea celular y el diseño experimental a utilizar se coordinarán con el usuario en base a las disponibles en el instituto y a los requerimientos del estudio a realizar.
El análisis estadístico de los resultados, la determinación de la LD50 y otros análisis más específicos, no están incluidos en el servicio básico, pero pueden coordinarse con el usuario.
Equipamiento: Flujo Laminar Clase II BSC Esco Modelo ACZ-451, Estufa de cultivo Panasonic MCO-18AC-PE Incusafe, Lector de placas DTX 880 (Beckman Coulter).
Detalle STAN: Análisis por PCR cuantitativa en tiempo real.
Metodología: El servicio incluye la cuantificación relativa de genes de interés, normalizado con genes de referencia, en muestras problema comparado con muestras control. Puede incluir, a pedido del interesado, la extracción previa de ácidos nucleicos (RNA, DNA), la síntesis de cDNA, la construcción de curvas de calibración y el análisis estadístico de los datos.
Equipamiento: Real-Time PCR Agilent Technologies Aria Mx
Detalle STAN: Sistema para la cuantificación de genomas equivalentes del virus SARS-COV-2 en hisopados nasofaríngeos y otras muestras biológicas (RUO).
Metodología: Consiste en un ensayo one-step qRT-PCR (R.U.O.) que permite la detección y la cuantificación de la carga viral del SARS-CoV-2 mediante el análisis de dos genes virales (ORF1ab y gene E) y un gen de referencia (RNAseP) sobre muestras de ARN viral obtenidas de diversas muestras biológicas. Las muestras pueden consistir en hisopados nasofaríngeos, líquido cefalorraquídeo (LCR), saliva, materia fecal, sangre o cualquier otra muestra biológica humana o animal, o de material inerte como por ejemplo aguas residuales, en donde pueda ser detectable el virus SARS-CoV-2. Estas muestras biológicas serán provistas por el contratante de acuerdo a su diseño de estudio. Todo el material será manipulado de acuerdo con el Cumplimiento de Requisitos de Bioseguridad. Los resultados incluirán un informe para ser utilizado por el contratante para diagnóstico y/o análisis epidemiológicos de acuerdo con el motivo de derivación de las muestras.
Detalle STAN: El servicio básico consiste en la adquisición de muestras biológicas en el citómetro de flujo. Las muestras pueden ser frescas o estar fijadas en tubos, eppendorfs o placas multiwell. Además, se pueden realizar estudios funcionales: monitorear la respuesta celular en el tiempo frente a un estímulo. También, se puede solicitar el procesamiento y marcación de las muestras biológicas para su adquisición y/o realizar el análisis de los datos obtenidos.
Se pueden extender certificaciones (operational qualification, OQ), consultar y lo hacemos a demanda. Equipamiento: Citómetro de Flujo BD Accuri C6 Plus: posee dos láseres: azul (488 nm) y rojo (630 nm). Se pueden medir 6 parámetros: FSC, SSC y 4 canales de fluorescencia (510nm-800 nm). Responsable del servicio: Julia Tau, personal de apoyo CONICET.
Detalle STAN: Optimización de las condiciones de cultivo para el crecimiento y diferenciación de diferentes tipos de propágulos fúngicos (conidios, blastosporos, pellets miceliares, microesclerocios) para ser utilizados como bioinsumos en el manejo de insectos plaga, a partir de cepas de hongos provistas por el contratante. Planificación y seguimiento de marcadores bioquímicos y moleculares útiles como parámetros de virulencia. Evaluación de las ventajas y desventajas de los diferentes tipos de propágulos.
Metodología: Se brindará tanto asesoramiento práctico en forma de talleres presenciales en el laboratorio donde se lo solicite, así como asesoramiento teórico mediante charlas tanto presenciales como virtuales. El asesoramiento está dirigido a personal tanto de instituciones públicas como universidades y laboratorios pertenecientes a instituciones del ámbito estatal, como a empresas privadas interesadas en el desarrollo y producción de productos bioinsecticidas.
Detalle STAN: Cuantificación y análisis de muestras de ácidos nucleicos mediante nano-espectrofotometría seguida de electroforesis.
Metodología: El STAN consta de dos etapas que pueden solicitarse juntas o por separado: 1) cuantificación precisa de ADN, ARN a partir de 1-2 µL de muestra con nano espectrofotómetro y análisis de los parámetros de calidad de los mismos mediante la relación entre las absorbancias 260nm/280 nm y 260nm/230 nm 2) Visualización, control de calidad y detección de productos de PCR, ADN y ARN, mediante electroforesis en geles de agarosa, la visualización de los geles se realiza por transiluminador UV.
Equipamiento: Nanodrop Thermo SCIENTIFIC, 2000c Spectophotometer; Cuba electroforetica Amersham Biosiences, HE33 mini horizontal submarine unit.
Detalle STAN: Dirigido a organismos públicos o privados que requieran el servicio ofrecido.
Metodología: La liofilización consiste en la concentración de líquidos mediante sublimación, desde un estado sólido a un estado vapor del agua. Eso se logra enfriando a temperaturas menores a 50C y muy bajas presiones. El método permite concentrar o secar muestras preservando las propiedades. Las muestras son congeladas en freezer a -80C, en recipientes acordes que permitan superficie accesible al vacío. Se exponen en el liofilador por un periodo que depende del volumen y condiciones requeridas.
Equipamiento: Liofilizador de bocas para recipientes tipo frasco VirTis 10-030.
Detalle STAN: Asesorar en técnicas bioquímicas y bioinformáticas orientadas a la biologia celular y molecular.
Metodología: Brindar asesoramiento en métodologías de programación y aprendizaje automático asi como en análisis bioquímico orientado a aplicaciones en biología molecular y celular de eucariotas y procariotas.
Detalle STAN: En el STAN ofrecemos la preparación de vesículas lipídicas (liposomas) de diferente composición y tamaño.
Metodología: En el STAN ofrecemos la preparación de vesículas lipídicas (liposomas) por distintas metodologías dependiendo el tamaño. Se prepararán liposomas de 50 nm, denominadas Small unillamelar vesicles (SUVs) por sonicación y large unillamelar vesicles (LUVs) de 100 o 200 nm, por extrusión.
Se podrán preparar de diferente composición lipídica y los mismos podrán ser cargados en su interior con fluoróforos, ATP, antibióticos, distintos principios activos, etc, dependiendo de la aplicación que quiera darle el cliente. Los lípidos y el contenido intravesicular deberán ser provistos por el cliente.
Responsable del servicio: Dra. Sabina Maté y Dra. Vanesa Herlax
Detalle STAN: Captura de imágenes y películas en un microscopio confocal espectral. Se estudian muestras biológicas (células, tejidos, organismos pequeños, materiales nano/microestructurados, moléculas orgánicas). Modos de adquisición: 2D, 3D, time-lapse, espectro de emisión/excitación, linescanning, tiempos de vida, técnicas STED, FRAP, FLIP, FRET, FLIM-FRET. Dirigido a docentes, investigadores y profesionales de organismos públicos y empresas.
Metodología: El microscopio confocal combina capacidades para implementar una gran variedad de técnicas y puede optimizarse para la detección de la más amplia variedad de sondas fluorescentes. El uso de un láser de luz blanco y de un láser de 405 nm permite elegir la mejor longitud de onda para excitar cada uno de los fluoróforos, e incluso realizar un espectro de excitación entre los 440 y 790 nm. De igual modo, se dispone de 4 detectores híbridos de última generación optimizados para la detección de la emisión entre 410 y 850 nm, posibilitando también el registro de espectros de emisión. Ya que las fuentes de luz son pulsadas y los detectores cuentan con una electrónica ultrarrápida, las medidas pueden realizarse en el modo FLIM (microscopía de tiempos de vida de fluorescencia). Además, se cuenta con un láser de STED de 775 nm para la obtención de imágenes de superresolución (entre 30 y 70 nm) para fluoróforos específicos del rango del rojo y NIR, y la combinación con la técnica de tiempos de vida permite su aplicación exclusiva en muestras vivas (TauSTED). El microscopio cuenta con accesorios para trabajo con células vivas y organismos pequeños como Caenorabdithis elegans (C.elegans, gusano de vida libre). El servicio no incluye un informe de los ensayos, se entregarán los datos e imágenes obtenidas.
Equipamiento: Microscopio confocal espectral en excitación y emisión Leica Stellaris 8 FALCON STED.
